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銅綠假單胞菌噬菌體PaP3末端酶大亞單位DNA結(jié)合能力的測定
目的 檢測銅綠假單胞菌噬菌體PaP3末端酶大亞單位與噬菌體基因組末端cos位點(diǎn)的結(jié)合能力.方法 通過PCR擴(kuò)增出末端酶大亞單位編碼基因tls,經(jīng)pMD-T18載體克隆至表達(dá)載體pQE31上,IPTG誘導(dǎo)表達(dá),獲得包涵體蛋白,用包涵體裂解液溶解包涵體,通過Ni-NTA親和層析,分離出重組目的蛋白rTLS,透析復(fù)性后,與生物素標(biāo)記的基因組末端cos片段進(jìn)行結(jié)合反應(yīng),通過EMSA檢測DNA滯后現(xiàn)象.結(jié)果 成功構(gòu)建了表達(dá)載體pQE-tls,獲得了純化的具有生物學(xué)活性的重組末端酶大亞單位rTLS,EMSA結(jié)果證實(shí)結(jié)合rTLS后的cos片段與無蛋白加入的對照組相比明顯滯后.結(jié)論 重組噬菌體PaP3末端酶大亞單位在體外可與基因組末端cos片段發(fā)生特異性結(jié)合,為進(jìn)一步研究該蛋白的功能奠定了基礎(chǔ).
作 者： 申曉冬 張克斌 李明 周瑩冰 蹇銳 胡曉梅 陳志瑾 饒賢才 胡福泉 SHEN Xiao-dong ZHANG Ke-bin LI Ming ZHOU Ying-bing JIAN Rui HU Xiao-mei CHEN Zhi-jin RAO Xian-cai HU Fu-quan 作者單位： 申曉冬,李明,周瑩冰,蹇銳,胡曉梅,陳志瑾,饒賢才,胡福泉,SHEN Xiao-dong,LI Ming,ZHOU Ying-bing,JIAN Rui,HU Xiao-mei,CHEN Zhi-jin,RAO Xian-cai,HU Fu-quan(第三軍醫(yī)大學(xué),基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部微生物學(xué)教研室,重慶市微生物工程實(shí)驗(yàn)室,重慶,400038)張克斌,ZHANG Ke-bin(第三軍醫(yī)大學(xué),新橋醫(yī)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)中心,重慶,400037)
刊 名： 第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào) ISTIC PKU 英文刊名： ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE 年，卷(期)： 2006 28(22) 分類號： Q55 Q782 Q936 關(guān)鍵詞： 末端酶大亞單位 噬菌體PaP3 EMSA 蛋白表達(dá)【銅綠假單胞菌噬菌體PaP3末端酶大亞單位DNA結(jié)合能力的測定】相關(guān)文章：
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