重組釀酒酵母5-氨基酮戊酸合酶在大腸桿菌的表達(dá)

重組釀酒酵母5-氨基酮戊酸合酶在大腸桿菌的表達(dá)

以釀酒酵母基因組為模板,采用PCR擴(kuò)增出編碼成熟5-氨基酮戊酸合酶(第一個(gè)氨基酸殘基為Asn63)的基因hem1,將其克隆到pMAL-2x中構(gòu)建重組表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化大腸桿菌表達(dá)菌株BL21(DE3),在0.5 mmol·L-1的IPTG誘導(dǎo)下,SDS-PAGE顯示分子量約為49 kD的特異條帶.重組菌在紫外燈下顯示紅色熒光,表明酶在大腸桿菌體內(nèi)活性表達(dá).體外反應(yīng)表明,在濃度超過0.1 mmol·L-1的IPTG誘導(dǎo)下,酶活力下降,培養(yǎng)基的初始pH值約為6.5,5-氨基酮戊酸產(chǎn)量達(dá)最大,且主要分泌到胞外.

作 者： 何曉梅 周靜 范軍 朱蘇文 程備久 HE Xiao-mei ZHOU Jing FAN Jun ZHU Su-wen CHENG Bei-jiu   作者單位： 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,合肥,230036  刊 名： 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL UNIVERSITY  年，卷(期)： 2006 33(4)  分類號(hào)： Q786  關(guān)鍵詞： 5-氨基酮戊酸合酶   釀酒酵母   重組表達(dá)   5-氨基酮戊酸產(chǎn)量  

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