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海南坡鹿外周血白細(xì)胞cDNA文庫的構(gòu)建
目的:構(gòu)建海南坡鹿外周血白細(xì)胞eDNA文庫.方法:采用RNAiso Reagent (TAKARA)處理新鮮血液,以總BNA抽提試劑盒(上海華舜)制備總RNA.利用SMART(Switching Mechanism at 5'end of RNA Transcript)技術(shù),用PaWerscriptTM反轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄合成第一鏈cDNA,LD-PeR擴(kuò)增獲得cDNA雙鏈,Sfi I酶切和CHROMA APIN-400TM柱分級分離后,500bp以上的片段與pDNRLIB載體連接,電轉(zhuǎn)化入E.coli DG5a,建成原始文庫.然后擴(kuò)增文庫并隨機(jī)挑取單菌落,酶切鑒定重組子插入片段大小.結(jié)果:經(jīng)鑒定,庫容量達(dá)到1.9×106克隆,原始文庫滴度為1.59×1010cfu/mL,重組率接近100%,擴(kuò)增后的文庫滴度為7.4×1012cfi/mL.插入片段大小分布為0.5～2.0kb,平均長度約為1.0kb.結(jié)論:所構(gòu)建文庫的各項(xiàng)指標(biāo)均達(dá)到要求,為篩選海南坡鹿已知和未知功能基因提供了材料來源,且為進(jìn)一步研究基因的結(jié)構(gòu)和功能奠定了重要基礎(chǔ).
作 者： 申明霞 劉濤 杜麗 王鳳陽 成鷹 許世英 吳科榜 李治深 符運(yùn)南 林賢梅 滿初日嘎 祁超 SHEN Ming-xia LIU Tao DU Li WANG Feng-pang CHENG Ying XU Shi-ying WU Ke-bang LI Zhi-shen FU Yun-nan LIN Xian-mei MAN Chu-ri-ga QI Chao 作者單位： 申明霞,SHEN Ming-xia(華中師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,湖北,武漢,430079;海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院,海口市動物基因工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,海南,�？�,570228)劉濤,杜麗,王鳳陽,成鷹,吳科榜,李治深,滿初日嘎,LIU Tao,DU Li,WANG Feng-pang,CHENG Ying,WU Ke-bang,LI Zhi-shen,MAN Chu-ri-ga(海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院,�？谑袆游锘蚬こ讨攸c(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,海南,�？�,570228)
許世英,符運(yùn)南,林賢梅,XU Shi-ying,FU Yun-nan,LIN Xian-mei(海南大田國家級自然保護(hù)區(qū),海南,東方,572600)
祁超,QI Chao(華中師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,湖北,武漢,430079)
刊 名： 生物技術(shù) PKU 英文刊名： BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2008 18(2) 分類號： Q785 關(guān)鍵詞： 海南坡鹿 外周血白細(xì)胞 cDNA文庫 SNART技術(shù)【海南坡鹿外周血白細(xì)胞cDNA文庫的構(gòu)建】相關(guān)文章：
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