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海蓬子鹽脅迫初期抑制消減雜交cDNA文庫的構(gòu)建
為提高縮葉肉質(zhì)鹽生植物海蓬子總RNA和mRNA的質(zhì)量,將改良CTAB法與Tripure 試劑盒方法相結(jié)合, 從 300 mg海蓬子發(fā)芽后20 d的幼苗中成功分離和純化了高純度的總RNA和mRNA.并以無NaCl處理為Driver,以 200 mmol/L NaCl處理 24 h、48 h、72 h的幼苗為Tester,通過cDNA雙鏈的合成及兩次PCR擴增,富集到兩組處理中差異表達(dá)的大小在200～1 300 的cDNA序列,pGEM-T的連接和藍(lán)白斑篩選表明雜交文庫滴度和重組率分別達(dá)到2.6×107和96%,共收集陽性克隆12 000個, 形成了抑制消減雜交的質(zhì)粒cDNA文庫.隨機挑取酶切質(zhì)粒的電泳分析表明,載體中均有插入片段.兩種RNA提取方法的結(jié)合有效提高了多汁多色素海蓬子RNA的質(zhì)量,高效抑制消減雜交文庫的建立為進(jìn)一步分析基因的差異表達(dá)及分離抗鹽基因奠定了基礎(chǔ).
作 者： 張大棟 馬鴻翔 吉曉佳 周春霖 王茂文 湯日圣 楊永華 ZHANGDa-dong MA Hong-xiang JI Xiao-jia ZHOU Chun-lin WANG Mao-wen TANG Ri-sheng YANG Yong-hua 作者單位： 張大棟,ZHANGDa-dong(江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)遺傳生理研究所暨江蘇省農(nóng)業(yè)生物學(xué)重點實驗室,江蘇,南京,210014;南京大學(xué)醫(yī)藥生物技術(shù)國家重點實驗室,江蘇,南京,210093)馬鴻翔,湯日圣,MA Hong-xiang,TANG Ri-sheng(江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)遺傳生理研究所暨江蘇省農(nóng)業(yè)生物學(xué)重點實驗室,江蘇,南京,210014)
吉曉佳,楊永華,JI Xiao-jia,YANG Yong-hua(南京大學(xué)醫(yī)藥生物技術(shù)國家重點實驗室,江蘇,南京,210093)
周春霖,王茂文,ZHOU Chun-lin,WANG Mao-wen(江蘇沿海地區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所,江蘇,鹽城,224002)
刊 名： 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報 ISTIC PKU 英文刊名： JIANGSU JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES 年，卷(期)： 2006 22(2) 分類號： Q785 關(guān)鍵詞： 鹽生植物海蓬子 抑制消減抑制雜交 cDNA文庫 RNA分離【海蓬子鹽脅迫初期抑制消減雜交cDNA文庫的構(gòu)建】相關(guān)文章：
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