內毒素結合肽的改良、原核表達及純化

內毒素結合肽的改良、原核表達及純化

目的:對人內毒素結合肽(endotoxin binding peptide,EBP)進行改良,獲得突變體mEBP(mutate of endotoxin binding peptide,mEBP)基因并進行原核表達,純化獲得高純度的mEBP.方法:應用PCR定點誘變方法獲得mEBP基因,構建PinpointXa-3/mEBP融合表達載體,在BL21(DE3)pLysS宿主菌進行表達,溶菌酶裂解法提取包涵體,融合蛋白經PinpointTMXa純化后,由factorXa酶切,獲得目的肽,RP-HPLC純化獲得高純度的mEBP.結果:應用PCR定點誘變技術完成了EBP第5,18位谷氨酰胺→賴氨酸的定點突變,且通過原核表達,色譜純化獲得了高純度的mEBP.結論:成功獲得高純度的mEBP,為下一步的抗內毒素功能檢測奠定基礎.

作 者： 孫亞麗 劉友生 楊海捷 SUN Ya-li LIU You-sheng YANG Hai-jie   作者單位： 第三軍醫(yī)大學西南醫(yī)院病理研究所,重慶,400038  刊 名： 中國生物工程雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINA BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 26(3)  分類號： Q81  關鍵詞： 內毒素結合肽   突變   表達   純化  

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