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β淀粉樣肽單克隆抗體可變區(qū)基因的5RACE擴(kuò)增及序列分析
目的:克隆并分析抗β淀粉樣肽單克隆抗體輕鏈與重鏈可變區(qū)基因.方法:從分泌抗β淀粉樣肽單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株A8中提取總RNA,根據(jù)恒定區(qū)序列設(shè)計(jì)基因特異性引物,通過(guò)5'RACE法擴(kuò)增抗體的輕鏈和重鏈可變區(qū)基因,測(cè)定并分析可變區(qū)基因序列,并克隆入pMD18-T載體.結(jié)果:重鏈可變區(qū)基因序列全長(zhǎng)450 bp,編碼150個(gè)氨基酸殘基;輕鏈可變區(qū)基因序列全長(zhǎng)429 bp,編碼143個(gè)氨基酸殘基.在GeneBank中對(duì)氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)分析,二者均符合小鼠IgG可變區(qū)基因的特征.根據(jù)Kabat法則對(duì)A8抗體輕鏈和重鏈可變區(qū)氨基酸序列基因進(jìn)行分析并確定了3個(gè)抗原互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)、4個(gè)框架區(qū)(FR)和信號(hào)肽.結(jié)論:通過(guò)5'RACE法得到了抗β淀粉樣肽單克隆抗體輕鏈與重鏈可變區(qū)基因,為進(jìn)一步研究抗體三維結(jié)構(gòu),以及對(duì)該抗體進(jìn)行人源化改造奠定了基礎(chǔ).
作 者： 王鑫 張瑩 何金生 WANG Xin ZHANG Ying HE Jin-Sheng 作者單位： 北京交通大學(xué),生物科學(xué)與技術(shù)研究所,北京,100044 刊 名： 生物技術(shù)通訊 ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2010 21(2) 分類號(hào)： Q78 關(guān)鍵詞： β淀粉樣肽 單克隆抗體 可變區(qū)序列 5'RACE【β淀粉樣肽單克隆抗體可變區(qū)基因的5RACE擴(kuò)增及序列分析】相關(guān)文章：
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