重組人胰高血糖素樣肽-1的表達(dá)及生物學(xué)活性

重組人胰高血糖素樣肽-1的表達(dá)及生物學(xué)活性

將人工合成的人胰高血糖素樣肽-1(human glucagon-like peptide-1,hGLP-1)基因插入質(zhì)粒載體pET-32a(+)中,構(gòu)建成rhGLP-1與硫氧還蛋白(thioredox)及六聚組氨酸(hexahistidine)的融合表達(dá)載體pET32-GLP-1,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)獲得表達(dá)菌株,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)發(fā)酵的菌體超聲破碎后,裂解液用Ni離子親和層析純化得到融合蛋白,經(jīng)腸激酶裂解,再次Ni離子親和層析,得到rhGLP-1樣品.經(jīng)SDS-PAGE和等電聚焦檢測(cè),樣品純度大于90%,等電點(diǎn)介于pH5.2～pH5.85之間.質(zhì)譜測(cè)定rhGLP-1分子量為3 355.0kDa,肽圖分析得到2 097.7kDa和1 005.5kDa兩個(gè)胰蛋白酶酶解片斷,均與理論分析結(jié)果一致.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明重組蛋白具有明顯的降血糖活性和促胰島素分泌作用.

作 者： 黃靜 徐進(jìn) 左翼 徐偉東 吳自榮 HUANG Jing XU Jin ZUO Yi XU Wei-dong WU Zi-rong   作者單位： 華東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,上海,200062  刊 名： 中國(guó)生物工程雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINA BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 26(1)  分類號(hào)： Q786  關(guān)鍵詞： 胰高血糖素樣肽-1   表達(dá)   生物學(xué)活性  

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