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層理鞭枝藻藻藍(lán)蛋白和藻紅藍(lán)蛋白β亞基Cys-155的藻膽色素共價(jià)偶聯(lián)
層理鞭枝藻(Mastigocladus laminosus PCC7603)藻藍(lán)蛋白β-CPC和藻紅藍(lán)蛋白β-PEC中均存在2個(gè)藻膽色素結(jié)合位點(diǎn)(cys-84和Cys-155),可與藻藍(lán)膽素(簡(jiǎn)稱PCB)發(fā)生共價(jià)偶聯(lián)反應(yīng),已有研究證實(shí)編碼基因?yàn)閍lr0617的裂合酶CpcS1是催化Cys-84與PCB共價(jià)偶聯(lián)的裂合酶.在研究Cys-155與PCB共價(jià)偶聯(lián)的過程中,通過BLAST軟件同源性對(duì)比分析后,篩選出4個(gè)基因:cpcT1、cpcT2、cpcS1、cpcS,其中基因cpcT1和cpcS2,利用分子克隆的技術(shù),根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要轉(zhuǎn)到載體pCDFDuet上,通過DNA電泳和蛋白質(zhì)電泳挑選出正確的克隆.此4個(gè)基因?qū)?yīng)的質(zhì)粒與在大腸桿菌內(nèi)生成PCB必需的質(zhì)粒pACYCDuet-hol-pcyA,以及質(zhì)粒pET-cpcB(C84S)或pET-pecB(C84A),共同轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)內(nèi),進(jìn)行體內(nèi)重組,得到各重組蛋白,經(jīng)過親和層析柱提純并透析,過濾掉金屬離子,純化透析后的蛋白經(jīng)過活性比較、蛋白質(zhì)電泳以及鋅染色、蛋白質(zhì)變性等試驗(yàn)以及熒光和紫外吸收光譜等鑒定,通過與相應(yīng)文獻(xiàn)中PCB光譜的比對(duì),確定編碼基因?yàn)閍ll5339的裂合酶CpcT1能高效地催化Cys-155與PCB共價(jià)偶聯(lián),而其余3個(gè)基因不能起到催化作用.由此,能催化脫輔基蛋白β-CPC和β-PEC的兩個(gè)位點(diǎn)共價(jià)偶聯(lián)PCB的裂合酶均被發(fā)現(xiàn).實(shí)驗(yàn)對(duì)于研究藻膽蛋白的生物合成、光合作用捕光機(jī)理以及藻膽體的組裝等有重要的意義.
作 者： 張娟 周可澄 夏坤 周明 ZHANG Juan ZHOU Ke-Cheng XIA Kun ZHOU Ming 作者單位： 張娟,周可澄,夏坤,ZHANG Juan,ZHOU Ke-Cheng,XIA Kun(華中科技大學(xué)環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院,武漢,430074)周明,ZHOU Ming(華中農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院,武漢,430070)
刊 名： 水生生物學(xué)報(bào) ISTIC PKU 英文刊名： ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA 年，卷(期)： 2010 34(2) 分類號(hào)： Q344~+.14 關(guān)鍵詞： 藻藍(lán)蛋白β-CPC 藻紅藍(lán)蛋白β-PEC 裂合酶CpcT1 體內(nèi)重組 β-CPC β-PEC Lyase CpeT1 Reconstitution in vivo【層理鞭枝藻藻藍(lán)蛋白和藻紅藍(lán)蛋白β亞基Cys-155的藻膽色素共價(jià)偶聯(lián)】相關(guān)文章：
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