穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞色素P4501A1人肝癌細(xì)胞系的建立

穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞色素P4501A1人肝癌細(xì)胞系的建立

目的:建立穩(wěn)定表達(dá)人細(xì)胞色素P4501A1(CYP1A1)的人肝癌細(xì)胞系(Bel-7402).方法:通過(guò)將人細(xì)胞色素P4501A1(CYP1A1)的表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到人肝癌細(xì)胞系(Bel-7402),經(jīng)G418抗性篩選得到穩(wěn)定的克隆并擴(kuò)大培養(yǎng)成系,Western Blotting檢測(cè)蛋白的表達(dá).細(xì)胞增殖試驗(yàn)鑒定CYP1A1的多環(huán)芳烴類(lèi)底物二甲基苯并蒽(DMBA)對(duì)Bel-7402/1A1細(xì)胞的增殖抑制作用.雙核微核實(shí)驗(yàn)對(duì)Bel-7402/1A1細(xì)胞進(jìn)行了遺傳毒理的短期實(shí)驗(yàn).結(jié)果:轉(zhuǎn)染后篩選得到的Bel-7402抗性克隆,Western Blotting檢測(cè)表明有較高的CYP1A1蛋白表達(dá).細(xì)胞暴露于DMBA時(shí),Bel-7402/1A1與Bel-7402細(xì)胞相比,細(xì)胞增殖明顯抑制.雙核微核試驗(yàn)表明Bel-7402/1A1細(xì)胞的微核率隨DMBA濃度增高而顯著增加,Bel-7402無(wú)明顯變化.連續(xù)傳代后仍有CYP1A1標(biāo)志酶EROD的較高表達(dá),該酶活性能被CYP1A1抑制劑α-萘黃酮抑制.結(jié)論:建立了一個(gè)新的穩(wěn)定表達(dá)CYP1A1的1個(gè)肝癌細(xì)胞系(Bel-7402/CYP1A1),可代謝多環(huán)芳烴化合物產(chǎn)生更大的毒性.該細(xì)胞系可用來(lái)篩選能被CYP1A1代謝的化合物,或能抑制CYP1A1活性的化合物,并可用來(lái)研究CYP1A1的催化性質(zhì)及被CYP1A1代謝的化合物的毒性機(jī)理.

作 者： 龐莉萍 崔景榮 PANG Li-ping CUI Jing-rong   作者單位： 北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部天然藥物與仿生藥物國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京,100083  刊 名： 中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF CHINA PHARMACEUTICAL UNIVERSITY  年，卷(期)： 2006 37(5)  分類(lèi)號(hào)： Q78  關(guān)鍵詞： CYP1A1   Bel-7402   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染   3-甲基膽蒽   二甲基苯并蒽  

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