HIV-1整合酶蛋白的可溶性表達(dá)及功能研究

HIV-1整合酶蛋白的可溶性表達(dá)及功能研究

HIV-1整合酶是HIV病毒復(fù)制中一個(gè)重要的酶,也是治療艾滋病藥物的一個(gè)重要靶點(diǎn).為了開(kāi)展以整合酶蛋白為靶點(diǎn)的抑制劑篩選,構(gòu)建HIV-1整合酶重組質(zhì)粒,在原核細(xì)胞中進(jìn)行可溶性表達(dá)和功能研究.通過(guò)重疊PCR技術(shù)引入F185K和C280S突變于HIV-1 B亞型標(biāo)準(zhǔn)株的整合酶cDNA片段中,PCR擴(kuò)增片段克隆到pET-28a(+)表達(dá)載體中,構(gòu)建重組質(zhì)粒,在E coli中進(jìn)行整合酶基因表達(dá),SDS-PAGE鑒定表達(dá)產(chǎn)物,親和層析純化蛋白,酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定整合酶的生物學(xué)活性.結(jié)果構(gòu)建的重組質(zhì)粒獲得高效穩(wěn)定的可溶性表達(dá),ELISA實(shí)驗(yàn)證實(shí)該蛋白具有整合酶的3'切割DNA和5'鏈轉(zhuǎn)移的活性.HIV-1整合酶蛋白的可溶性表達(dá)和活性研究為建立以整合酶為靶點(diǎn)的抗HIV藥物篩選平臺(tái)打下了基礎(chǔ).

作 者： 程紹輝 馬曉慧 何紅秋 劉斌 陳慰祖 王存新 CHENG Shao-hui MA Xiao-hui HE Hong-qiu LIU Bin CHEN Wei-zu WANG Cun-xin   作者單位： 北京工業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與生物工程學(xué)院,北京,100022  刊 名： 中國(guó)生物工程雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINA BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 26(1)  分類(lèi)號(hào)： Q786  關(guān)鍵詞： HIV-1   整合酶   克隆   表達(dá)   ELISA  

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